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浅析影响胎牛血清质量的几大因素

时间:2017-02-27     作者:北京华创恒达科技有限公司【原创】   阅读


市场上的胎牛血清种类繁多,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣。深圳市碧安生物技术有限公司总结如下:


1 外观

拿到血清,最先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要


1.1 颜色
根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

 

1.2 沉淀
很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。

血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。

国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。

进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。

当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程zui好在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。


1.3 澄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,这对于初步接触血清的人很难判断,但把两者进行对比,可容易分辨。


2 主要技术指标

目前国内血清的质量标准是2005版的《中华人民共和国药典》,主要指标有以下几点:


2.1 内毒素
标 准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分,因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前,国产血清基本都能 达到这一要求,很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我国标准10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清质量也未见影响。可见,内毒素含量偏高不影响 质量,除非含量极高,预示着已经污染。


2.2 总蛋白含量
胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采血的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。

2.3 血红蛋白
标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高,反之,数值越低。


2.4 pH
国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。


2.5 微生物
包 括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高,细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制,支原体经过 0.1um过滤,大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的,主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大。病原 性病毒,特别是BVDV,在国产血清中几乎90%以上都存在,这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一,而进口胎牛血清中基本都控制的很好。


2.6 免疫球蛋白
国产血清的只是定性检测,结果也很不准确,进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况,国产血清,基本都是新生牛的,血清中容易产生IgM,IgG的含量也偏高,进口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低。


2.7 其它
不 管是国产还是进口血清,都是不测抗生素的(无四环素胎牛血清除外)。国外,抗生素的使用很严格,用量也很少,每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的,因此可 以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低;国内,抗生素的滥用已成了普遍现象,血清中残留很高,对细胞培养极为不利,这是国产血清质量差的根本原因。


3、血源

市场上的血清血源主要分为中国、北美、南美和澳洲。


3.1 国产血清质量差,这是公认的,主要原因并不是生产厂家的责任,而是天然环境差和抗生素的大量使用。国内环境污染严重,同时饲养过程中抗生素极其滥用,有毒有害物质会大量残留在血清中,zui终不利于细胞的生长。


3.2 南美血清,来源很多,如Bioind的巴拿马、Gibco的乌拉圭、巴西等,这些血清由于采血的不可控性,质量参差不齐,当然,相对于国内血清来说好的 多。另外,国内销售的南美血清大多颜色鲜红,如Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,这可能和各国的采血、生产工艺有关。


3.3 北美血清,主要来自美国和加拿大,如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、 26140-079等。这类血清,等级越高的颜色越淡,表现为淡黄中带一点微红,SH30070和SH30396对比就很明显,特级胎牛血清基本就能进行 干细胞培养。北美血清还有一个显著特点就是每瓶血清都能溯源,这对一些大型的疫苗厂、药厂尤为重要。


3.4、澳洲血清,来源主要是新西兰和澳大利亚,这是在北美血清禁运之后进入中国市场的,一般不具有溯源功能,由于生产、运输等原因,价格相对来说比较贵。拿Gibco的10099和16000相比较,后者质量等级更高,颜色更淡,性价比更高。


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